Рестрикцијски ензим , такође зван рестрикциона ендонуклеаза , протеин који производе бактерије које цепа ДНК на одређеним местима дуж молекула. У бактеријској ћелији, рестрикциони ензими цепати стране ДНК, чиме се елиминишу заражени организми. Рестриктивни ензими се могу изоловати из бактеријских ћелија и користити у лабораторији за манипулисање фрагментима ДНК, попут оних који садрже гене; из тог разлога су неопходни алати за технологија рекомбинантне ДНК ( генетски инжењеринг ).
библиотека цДНА Библиотека цДНА представља колекцију само гена које организам кодира у протеине. Комплементарна ДНК, или цДНА, настаје обрнутом транскрипцијом мессенгер РНА, а библиотека цДНА се генерише коришћењем технологије клонирања ДНК. Енцицлопӕдиа Британница, Инц.
Бактерија користи рестрикциони ензим за одбрану од бактеријских вируса тзв бактериофаги , или фаге. Када фаг зарази бактерију, убацује своју ДНК у бактеријску ћелију како би се могла реплицирати. Рестриктивни ензим спречава репликацију фаге ДНК сечењем на више делова. Рестрикцијски ензими су именовани због њихове способности да ограниче или ограниче број сојева бактериофага који могу да заразе бактерију.
једна од три главне функције стабљика је да
Сваки рестрикциони ензим препознаје кратку, специфичну секвенцу нуклеотидних база (четири основне хемијске подјединице линеарног дволанчаног молекула ДНК - аденин, цитозин, тимин и гванин). Ови региони се називају секвенце препознавања или места препознавања и насумично се дистрибуирају по ДНК. Различите бактеријске врста праве рестрикционе ензиме који препознају различите нуклеотидне секвенце.
Када рестрикциона ендонуклеаза препозна секвенцу, она прореже молекул ДНК катализујући хидролиза (цепање хемијске везе додавањем молекула воде) везе између суседни нуклеотиди. Бактерије спречавају да се њихова сопствена ДНК разгради на овај начин прикривајући своје секвенце препознавања. Ензими названи метилазе додају метилне групе (—ЦХ3) на аденинске или цитозинске базе унутар секвенце препознавања, која је на тај начин модификована и заштићена од ендонуклеазе. Рестрикциони ензим и његова одговарајућа метилаза конституисати систем рестрикције-модификације бактеријске врсте.
Традиционално су препознате четири врсте рестрикционих ензима, означене као И, ИИ, ИИИ и ИВ, које се првенствено разликују у структури, месту цепања, специфичности и кофакторима. Ензими типа И и ИИИ су слични по томе што и рестрикционе и метилазне активности спроводи један велики ензимски комплекс, за разлику од система типа ИИ, у којем рестрикциони ензим не зависи од своје метилазе. Рестриктивни ензими типа ИИ такође се разликују од типова И и ИИИ по томе што цепају ДНК на одређеним местима унутар места препознавања; други насумице цепају ДНК, понекад стотине база из секвенце препознавања. Неколико хиљада рестриктивних ензима типа ИИ идентификовано је из различитих врста бактерија. Ови ензими препознају неколико стотина различитих секвенци, обично дужине од четири до осам база. Рестриктивни ензими типа ИВ цепају само метилирану ДНК и показују слабу специфичност секвенце.
Рестриктивни ензими су крајем 1960-их и почетком 1970-их открили и окарактерисали молекуларни биолози Вернер Арбер, Хамилтон О. Смитх и Даниел Натханс. Способност ензима да режу ДНК на прецизним локацијама омогућила је истраживачима да изолују фрагменте који садрже гене и рекомбинују их са другим молекулима ДНК - тј. Да клонирају гене. Имена рестрикционих ензима изведена су из рода, врсте и соја ознаке бактерија које их производе; на пример, ензим Одјек РИ производи Есцхерицхиа цоли сој РИ13. Сматра се да рестрикциони ензими потичу из заједничког протеина предака и еволуирали су да препознају специфичне секвенце кроз процесе као што су генетска рекомбинација и амплификација гена.
